Prueba molecular para Salmonelosis

La detección de contaminación por Salmonella spp. en aves de corral y sus derivados se realiza utilizando métodos convencionales de cultivos microbiológicos, los cuales presentan limitaciones importantes para la detección eficaz de dicha contaminación. Los métodos clásicos de diagnóstico bacteriológico de Salmonella spp. son laboriosos, requieren tiempo y no todas las cepas aisladas pueden ser identificadas, por lo cual la información que brindan es limitada y dificulta la toma de decisiones.

La sensibilidad y especificidad de los métodos de cultivo dependen de la calidad, la toma adecuada de muestras, el almacenamiento y el número de unidades formadoras de colonia (UFC) presentes en la muestra, además de la habilidad del microbiólogo para detectar su presencia y la necesidad de un laboratorio de microbiología de alimentos para realizar el proceso. 

Sin embargo, a través del tiempo se han desarrollado métodos más sensibles y específicos que detectan la infección por Salmonella spp. en humanos y que aún no han sido implementados en la industria agropecuaria. Estas alternativas para la detección de contaminación por Salmonella spp. en huevos consisten en la utilización de pruebas de diagnóstico rápidas, sensibles y específicas basadas en métodos de detección molecular.

La técnica basada en la reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction o PCR) ha revolucionado el diagnóstico molecular de las enfermedades infecciosas. 

Razones científico-técnicas de por qué utilizar la técnica PCR para detección de Salmonelosis:

1. A diferencia de los métodos tradicionales que requieren 6 o 7 días para dar un resultado definitivo, PCR permite obtener los resultados en sólo 1 a 3 días, dependiendo de diversas modificaciones en el protocolo de trabajo, permitiendo la detección e identificación rápida y precisa de Salmonella.

2. La sensibilidad de las pruebas de PCR oscilan entre el 70 y 75% cuando la extracción del ADN se realiza con un método simple de lisis, en el cual no se usó la purificación del ADN; pero estos resultados de sensibilidad pueden mejorarse modificando el método de extracción, incluyendo un paso de purificación del ADN o utilizando un método comercial de extracción, pues las muestras de clara-yema tienen alto contenido proteico que puede interferir en la PCR. Sin embargo, la sensibilidad alcanzada con la estandarización de estas pruebas de PCR es más alta que la que se obtiene con cultivos convencionales, los cuales alcanzan una sensibilidad variable que puede fluctuar desde el 0-100% de acuerdo a varios factores, como la viabilidad de las bacterias que se encuentran en la muestra y la recolección y transporte de la misma. Esto significa que la PCR no requiere de la existencia de bacterias vivas o viables en la muestra para diagnosticar una contaminación o infección.

3. La utilidad de la prueba de PCR para detección del gen hilA está basada en la posibilidad de utilizarla para detectar contaminación por el género Salmonella en huevos y otras muestras. La PCR múltiple confirma si esta bacteria pertenece al serovar Typhimurium o Enteritidis, arrojando una mayor información si se precisa la identificación por serotipo.

4. La especificidad de la PCR múltiple es de 98,4% y la del gen hilA de un 100%; ambas especificidades son adecuadas para confiar que el resultado es verdadero, siendo la PCR para hilA 100% específica de género, lo cual tiene ventajas al momento de hacer un diagnóstico de contaminación de huevos por esta bacteria.

5. La utilización de estas pruebas de PCR permiten hacer una verificación y control de la salmonelosis. Por su rapidez y precisión, ésta será una herramienta fundamental para lograr la comercialización internacional de huevos, cumpliendo una de las normas de control sanitario exigidas para tal fin.

Referencias Bibliográficas:

1. CM Pérez, MM Sánchez, S Henao, NM Cardona-Castro. (sede Web). 2008 (acceso 12 de junio del 2016). Disponible en:http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0301-732X2008000300003&script=sci_arttext